腹0水制备产生单克0隆抗0体
0. 5 mL 弗 氏 完 全 佐 剂 腹 腔 注 射 4 只 雌性 BALB / c小鼠,同时培养杂交瘤细胞,弗氏完全佐剂注射七天后,收集状态较好的杂交瘤细胞,洗涤后稀释注入小鼠腹腔,每只小鼠约 1 × 106 个,杂交瘤细胞注射 7-10天后观察可见小鼠腹部肿大,则可以进行腹0水采集。
果蝇 mrj 的表达情况的检测
分别提取野0生型果蝇 R6 品系和 mrj 的 p 因子插入突变品系 15059 总蛋白,测定蛋白浓度后,上样量为 50 μg进行 SDS-PAGE 电泳,使用制备的 MRJ 单克0隆抗0体进行 Western Blot 检测。
使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度(按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制)。备注:推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。
2. 用振荡器充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需用量(按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl)与抗原按体积比1:1混合,并用振荡器剧烈振荡5-10min,直至静止放置10min水油相不分层。备注:与抗原混合前佐剂分层属正常现象,但必须充分混匀后才能取用。
3. 通过皮下或肌肉单点注射免0疫动物,小鼠每针次100μl,家兔每针次200μl。
(1)佐剂与抗原混合后应尽快注射,若放置时间较长出现水油相分层,则必须按上述步骤2重新振荡混匀;
(2)抽入针管前应摇匀,抽入针管后应尽快注射;
(3)尽量选择引流淋巴0结附近(如腋窝和腹0股0沟附近)的皮下或肌肉进行免0疫。
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通过皮下或肌肉单点注射免0疫动物,小鼠每针次100μl,家兔每针次200μl。
(1)佐剂与抗原混合后应尽快注射,转染试剂盒,若放置时间较长出现水油相分层,则必须按上述步骤2重新振荡混匀;
(2)抽入针管前应摇匀,抽入针管后应尽快注射;
(3)尽量选择引流淋巴0结附近(如腋窝和腹0股0沟附近)的皮下或肌肉进行免0疫。
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