鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验

目地：学习培训运用细菌检测基因变异的方式 

Ames实验  即鼠伤寒论沙门菌营养成分缺点型回复突变实验，是现阶段检验基因变异常见方式之一。 

基本原理：运用鼠伤寒论沙门菌基因突变株，即组氨酸缺点型，其初始菌种菌身体的组氨酸是根据本身一系列酶催化反应速度生成的，这类能本身生成所需营养成分成分的菌种称为菌种。本实验用鼠伤寒论沙门菌为基因突变株，其不可以生成组氨酸，而务必由外部给予这类菌珠被称之为营养成分缺点式营养成分实变形（his-）。当诱变剂功效于菌种后，在菌种遗传信息的特选择点产生遗传基因回复突变变成（his），故在欠缺组氨酸的培养液上，只存极少数自发性回变菌体生长发育，而能引起病菌回变的致基因突变物可使病菌生长发育增加，进而可分辨被药品是不是具备致实转性。 

原材料：菌种，鼠伤寒论沙门菌TA97，TA98，TA100，TA102。 

器械：恒温培养箱，烘干箱，髙压灭菌锅，水溶性锅，紫外线灭菌灯（15w），药品天平秤，电子分析天平 酒精喷灯，过滤纸片，平皿，量杯，塑料吸管。 

培养液配置 

1．Vogel-Bonner液10×（VB液10倍浓缩）用以配置底层基本上培养液。配置方式：甘露醇（MgSO4·7H2O）1g，柠檬酸钠（C6H8O7·H2O）10g，磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）65.5g，硫酸铵氢铵钠（NaNH4HPO4·4H2O）17.5g。将以上成份先后用纯净水融解、搅拌，随后加纯净水至500ml，置4℃电冰箱储存。 

2．底层基本上培养液  取VB液（10倍）100ml，添加纯净水800ml，用1mol/L NaOH调pH至7.0，随后添加琼脂粉12—15g，经121℃二十分钟高压灭菌。待冷至800C上下时，添加100ml早已112℃二十分钟高压灭菌的20%葡萄糖水液，搅拌后浇筑平板电脑。 

3．顶层培养液  D-生物素12.4mg，L-硫酸组氨酸9.5mg，NaCl5g，琼脂粉6g，以上成份先后加温融解，混和，随后加纯净水至1000ml。散装后经121℃15分钟高压灭菌预留。