采用细菌16S rDNA 的PCR-RFLP技术,以西北地区土垫旱耕人为土为材料,模拟田间过量施肥水平,经室内恒温短期培养,研究了过量施肥下酰胺态氮、硝态氮和铵态氮对土壤细菌多样性的影响。结果显示:PCR-RFLP分析酰胺态氮(T1)、硝态氮(T2)和铵态氮(T3)过量施肥处理的细菌16S rDNA 克隆文库,分别得到17、25 和130个酶切分型,不施肥对照(CK1)和正常施肥对照(CK2)分别得到119 和187个酶切分型,表明正常施肥处理的酶切分型*多,过量使用酰胺态氮和硝态氮减少了酶切类型,而过量施用铵态氮可以维持与不施肥对照相近的酶切类型数量。采用α多样性测度对试验结果进行分析统计表明,不同处理间土壤细菌的多样性指数(H'、Ds)和物种丰富度指数(dMa)均为CK2>T3>CK1>T2>T1处理,表明合理施肥可显著增加土壤中细菌的多样性,而过量施用酰胺态氮则减少细菌的多样性,使用铵态氮处理可维持细菌多样性;除正常施肥对照(CK2)外,其余各处理都出现了优势菌种。通过对优势菌的16SrDNA序列比对发现,酰胺态氮处理都为未培养细菌,硝态氮处理和铵态氮处理的优势菌呈现了菌属多样性,前者包括变形菌门的假单胞菌属和寡养单胞菌属、芽单胞菌门的未培养芽单胞菌属和未培养土壤细菌,后者为未培养酸杆菌属、变形菌门寡养单胞菌属和厚壁菌门芽孢杆菌属,表明不同施肥方式改变了土壤细菌的群落结构。
土壤微生物群落结构是土壤生态功能的基础,它与土壤的化学性质、土壤团聚体的形成以及土壤污染物的降解等密切相关[1]。Jon[2]在Nature杂志上指出,生态学正走向地下,如果忽视土壤环境中生物多样性及其生态功能研究,将是令人担忧的。Prosser等[3]综述了土壤微生物生态理论研究的重要意义。因此,揭示土壤微生物生态变化与环境之间的相互关系已成为目前的研究热点。施肥是影响土壤质量及其可持续利用的重要农业措施之一[4]。由于肥料施用方式(施用量、长期施用或短期施用)、土壤类型和利用方式等因素的影响[5-6],使得施肥对土壤微生物多样性的影响非常复杂,相关的报道结论不一[7],反映出这方面的研究还有待进一步深化。目前,国内针对黄土高原旱地土壤中微生物群落多样性与土壤肥力关系的研究相对滞后,亟待加强。因此,本文拟以西北地区旱地土壤为研究对象,采用PCR-RFLP技术,以期探讨过量施肥时不同氮肥形态与旱地土壤细菌多样性的关系,从而为合理施肥、避免生态破坏、改善农业环境提供必要的理论依据。