基因遗传毒副作用实验
2.1.1 Ames试验 Ames实验是检验化合物基因变异的常见方式。基本的Ames实验采用四个检测菌种(TA97、TA98、TA100、TA102),近期有些人明确提出提升TA1535检测菌种,该菌株尤其适用检验混合物质的致突变性。现阶段发生的再生菌种具备更多的敏感和非特异,如YG7014、TG7108,欠缺编号O6-羟基鸟嘌呤DNA甲基化转移酶的ogtST遗传基因,专用型于对烷化剂造成的DNA损伤检验;引进乙酰转移酶遗传基因的YG1024、YG1029菌种,对氟苯对二甲苯和芳香胺的敏感度比原菌种高100倍以上。检测新陈代谢活性系统软件一般采取由Aro-clor1254(PCBs)诱发大白鼠肝微粒体酶的S9;海外也是有用工肝S9的报导,实验证实其新陈代谢活力显著高过鼠S9。为了更好地摆脱S9制取上的艰难和多变性,Josephy等将沙门菌的芳香胺N-乙酰转移酶遗传基因和人们细胞色素P-450遗传基因Cyp1A2引进体细胞,搭建了在无外源性S9时也可验出芳香胺诱变性的Ames检测菌种如DJ4501A2。
2.1.2 TK基因变异实验 TK基因变异实验是一种哺乳类动物细胞遗传基因正方向基因突变实验,近些年其使用市场价值有显著的提升。TK基因编码胸苷激酶,该酶催化反应胸苷的磷酸化反映,转化成胸苷阿糖腺苷(TMP)。假如存有三氟苷(TFT)等嘧啶类似物,则造成不正常的TMP,掺加DNA中造成细胞死亡。如待检物能造成TK基因变异,胸苷激酶则不可以生成,而在核苷类似物的出现下可以生存。TK基因变异实验可验出包含点突变、大的缺少、重新组合、性染色体异倍性和其它比较大范畴基因更改以内的多种多样基因遗传更改。实验选用的靶细胞系关键有小白鼠淋巴肿瘤体细胞L5178Y及其人们淋巴结纤维细胞TK6和WTK1等。其基因型均为tk/-。Honma(本间正充)和赵志实(1999)强调原用感染時间3~6h针对充足验出断裂剂和椎形而言这一時间过短,获呈阴性結果时要增加至24h。据材料表明针对同一呈阳性待检物,WTK1体细胞的突变频率远远高于TK6体细胞,觉得与WTK1存有p53基因变异相关。Do-brovolsky(1999)创建了tk/-转基因小鼠,可用以身体内实验。