毛巾箱除菌试验方法
A.1方法概述
将微生物悬浮液涂覆到试验样块上,把试验样块连接到试验毛巾负载上,所有的负载装载于器具中,按指定的除菌程序运行。对试验样块在除菌程序运行前后的含菌量进行计数,计算除菌率和除菌对数值。
A.2试验菌种和仪器
A.2.1试验用菌
大肠埃希氏菌Escherichia coli AS 1.0090
金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus AS 1.0089
根据使用要求,也可选用其他菌种或菌株作为试验用菌,但所有菌种或菌株应由国家相应菌种保藏管理中心提供并在报告中标明试验用菌种名称及分类号。
实验室应依据国家相关规定安全使用试验微生物,并且尽量选择非致病或低致病微生物。培养菌种使用的各种培养基组份,应符合菌种保藏管理中心的要求。
所有涉及微生物操作的器皿和材料都应提前进行灭菌,**湿热灭菌(121 ℃,20 min)。
A.2.2培养条件
如果菌种提供机构有特殊要求,应以其要求为准。没有特殊要求的,试验菌种的一般性培养条件应符合GB21551.2-2010中A5.2、A5.3的要求。
本文件的试验条件都是以大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌为例,如果是其他试验菌种,相应的试验条件要随之改变。
A.2.3试验菌种的活化和菌液的制备
将标准菌株接种于斜面固体培养基上,在(37±1)℃条件下培养24 h后,在5℃~~10℃条件下保藏(不应超过1个月)﹐作为斜面保藏菌。
将斜面保藏菌转接到平板固体培养基上,在(37±1)℃条件下培养(24士1)h,每天转接1次,不超过2周。试验时应采用3~14代、24 h内转接的新鲜细菌培养物。
用接种环从新鲜培养物上刮1~2环新鲜细菌,置入0.9%的生理盐水中,并依次做10倍梯度稀释液,选择菌液浓度为(1×109~9x10')CFU/mL的稀释液作为试验用菌液,按GB4789.2的方法操作。
A.2.4仪器
生化培养箱:温控*大允许误差±1℃;冷藏箱:s ℃~10 ℃;
超净工作台(100级)或生物安全柜(100级)﹔压力蒸汽灭菌器:
平皿、试管、移液管(*大允许误差±0.01 mL)、接种环、酒精灯等试验室常用器具。
A.3试验负载和试验样块
A.3.1试验负载
采用符合GB/T 20292-2006要求的毛巾负载。