抗过敏性能试验方法
D.1试验用过敏原
粉尘螨过敏原Der f1
测试使用的初始过敏原浓度为50 ng/mI-100 ng/mL.
注1:粉尘螨过敏原可从蝶虫中自行提取，也可使用提纯的商品化螨虫过敏原。注2:根据使用要求,也可选用其他种类的过教原作为试验过敏原。
提交数据结果时,应注明对应的过敏原名称及编号。
D.2粉尘螨过敏原
Der f1的制备
D.2.1材料
PBS-T（pH 7.4）提取液的配制磷酸二氢钾(KH PO4
0.27 g
磷酸氢二钠(NazHPO4
1.42g
氯化钠(NaCl
8.0 g
氯化钾(KCI)
0.2g
将上述物质溶解于800mL去离子水中,用浓盐酸调pH至7.4,*后定容至1L.加入0.05%(体积分数)的吐温-20。
新鲜配制的PBS-T储存于4℃冰箱，保存,备用。
D.2.2试验步骤
D.2.2.1 液氮研磨
取适量的粉尘螨培养物(包含姨虫虫体和饲料),放入研钵中
和入适量液氨,保证液氮液面没过
样品。在液氮挥发后将样品于15 ℃~20 ℃环境下放置10 min加入液氮，按照上述同样的方式反复冻融4次。在研钵内反复研磨冻融后的样品 10 min，为了保证研磨效来的一致性,研磨过程中顺时针1min，逆时针d min，如此交替。
D.2.2.2超声破碎提取
将研磨后的样品转移至无菌离心管内，按1:10(质量体积比, mgmL)比例，加入PBS-T提取液，超声（超声条件:超声2s暂停5 s，共进行5 min，功率 150W)，起声过程中应将离心管置于冰水混合物中，防止升温。
D.2.2.3离心、除菌
将超声后的样品在 8 00o rme , 4℃条件下离心10 min，取上演薇，采用g22 um孔径的过滤器过滤除菌。
D.2.2.4确定浓度
使用相应的检测试剂盒，将过谴后的样液进行粉尘螨过敏原(Def1)含量的测定，样品置于-20℃低温冰箱保存备用。
研磨后若不能及时进行超声处理，加完PBS-T提取液后置于4℃保存，保存时间不应超过1h。
