食品安全国家标准
动物性食品中 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和
雌酮残留量的测定气相色谱-质谱法
1范围
本文件规定了牛、羊、猪,鸡肌肉和猪肝脏、肾脏、脂肪中类固醇激素类药物(173-雌二醇、雌三醇、炔雌醇﹑雌酮)残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法。
本文件适用于牛、羊、猪、鸡肌肉和猪肝脏、肾脏、脂肪中173-雌二醇、雌三醇、炔雌醇,雌酮残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语与定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中残留的17β-雌二醇、雌三醇,炔雌醇,雌酮,经酶解,提取,净化和衍生,气相色谱-质谱法测定，外标法定量。
8测定步骤
8.1提取
取试样5 g(准确至士0.02 g)，于50 mL离心管﹐加醋酸钠缓冲液10 mL,均质 l min,涡旋振荡2min,加葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶20 ul,50℃酶解2 h,加乙酸乙酯20 mL,涡旋振荡3 min,l0 000r/min离心5 min,收集上清液于100 ml.鸡心瓶中,残渣中加乙酸乙酯20ml,重复提取1次,合并上清液,40℃水浴旋转蒸发至近干,用氢氧化钠溶液6 ml.分3次溶解洗涤鸡心瓶,洗液转入50mL.离心管中,加正己烷20 mL,涡旋振荡l min,1o 000 r/min 离心5 min,收集下层清液,加醋酸铵溶液lml.,用冰醋酸调pH至5.0～5.2,备用。
8.2净化
取C,。固相萃取柱,依次用甲醇,水各5 mL活化。取备用液﹐过柱,分别用水、甲醇水溶液各5 ml.淋洗,抽干,加甲醇5mL.洗脱,收集洗脱液,50℃水浴氮气吹干。加乙酸乙酯正己烷溶液5 mL.使溶解﹐备用;取硅胶固相萃取柱,加正已烷5mL活化,取备用液过柱,淋洗﹐抽干,加乙腈5 ml.洗脱,收集洗脱液，5o℃水浴氮气吹干。
8.3 衍生
加甲苯.衍生化试剂各 100 uL于上述氮气吹干的玻璃试管中,振荡混合,封口,于 80 ℃烘箱中衍生60min,冷却,供GC-MS测定。
8.4 标准工作曲线制备
精密量取混合标准工作液适量,用甲醇稀释成浓度分别10 ug/L.50 ug/1、100 pg/L、200 pxg/L、500ug/L,1 000 ug/1系列标准溶液,各准确量取500 u.L,50℃水浴氮气吹干,按步骤7.3进行衍生,冷却后再各加甲苯300p.L进行GC-MS测定。以17/3-雌二醇、雌三醇,炔雌醇和雌酮各浓度为横坐标,相应的定量离子峰面积为纵坐标,绘制标准曲线或求线性回归方程。
