干细胞质量检测-飞凡检测
2019年ISSCR上,WiCell ResearchInstitute(下文中简称为WiCell)发表了一篇关于人多能干细胞(hPSC)质量的poster,文中强调了细胞质量对研究的重要性。低质量的细胞会影响实验结果的重现性、导致错误的实验结论、浪费时间、消耗资源。
WiCell一共收集了来自31个不同实验室的1732株iPS细胞系,截止到poster发表之日,一共有839株细胞系已经完成检测,并且这839株细胞系已被提供给了更多的科研机构和院所,但令人震惊的是,其中超过1/3的细胞株(285株细胞系)未通过WiCell的常规细胞质量测试!WiCell进行的细胞质量鉴定项目(括号内为实际检测机构),包括
解冻复苏及使用光学显微镜观察的自发分化(WiCell)
核型检测:G-banding(WiCell)
均一性:使用Promega PowerPlex 16 HS System检测Short Tandem Repeat(STR) (UW‐Madison Hospitals and Clinics)
无菌测试(Bacteriostasis/Fungistasis):使用direct transfermethod进行14天的培养(Steris)
支原体检测:使用Lonza Mycoalert或Biological Industries EZ PCRMycoplasma Kit(WiCell)
如上图所示,这285株未通过细胞质量标准的原因如下:
61%的细胞系的核型发生改变,其中54%的核型异常原因为recurrentabnormalities,balanced translocation出现的核型异常占20%。
10%的细胞系发生STR异常,包括细胞系的交叉污染、身份错配或性别错配。实际情况可能更为严重,由于某些同一性别的特定细胞系也可能被错误识别而未能检测出。
超过25%的细胞系(80株以上)冻存后无法复苏,或无法进行贴壁、无法扩增或是分化区域太多。
12株细胞系未通过无菌测试,1株细胞系支原体检测阳性。
细胞质量对hPSC研究至关重要,获得高质量的hPSC是研究成功的必要条件,而在日常对hPSC进行维持培养的过程中也应选择高质量的hPSC培养基并定期对细胞进行质量监控。
飞凡检测生物依托拥有多年服务经验的技术团队和先进的仪器设备,并严格按照《干细胞制剂制备与质检行业标准(试行)》中提及的10种必检项目及检测要求,快速地为客户提供全方位的干细胞质量检测服务。
质量检测是为了保证干细胞经特定体外处理后对其安全性、有效性和质量可控性进行较全面的质量检测,包括但不限以下10各方面:
细胞鉴别:细胞形态、遗传学、代谢酶亚型谱分析、表面标志物鉴定、特定基因表达产物鉴定。
存活率及生长活性:活细胞计数、细胞倍增时间检测、细胞周期检测、克隆形成率、端粒酶活性检测等。
纯度和均一性:细胞表面标志物鉴定、遗传多态性、特定生物学活性。
无菌试验和支原体检测:依据现行版《中华人民共和国药典》中的生物制品无菌试验和支原体检测流程。
细胞内外源致病因子检测:牛源特定病毒的检测(如使用过牛血清);猪源细小病毒检测(如使用过胰酶等猪源材料等。
内毒素检测:应根据现行版《中华人民共和国药典》中的内毒素检测流程。
异常免疫学反应(异体来源):对人总淋巴细胞增殖、对不同淋巴细胞亚群增殖能力的影响、对相关细胞因子分泌的影响。
致瘤性:免疫缺陷动物体内致瘤试验。
生物学效力试验:检测干细胞分化潜能、诱导分化细胞的结构和生理功能、对免疫细胞的调节能力、分泌特定细胞因子、表达特定基因和蛋白。
培养基及其他添加成分残余量检测:牛血清蛋白、抗生素、细胞因子等残留检测。