基因敲入小鼠
基因敲入可以在目的基因位置引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型);或将报告基因(如EGFP,mRFP,mCherry,mYFP,或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达。也可以用报告基因取代小鼠本身的基因,使KO/KI发生。
应用
1、用于药物筛选相关研究;
2、用于信号通路的研究;
3、用于示踪的相关研究。
基因敲入小鼠
建系原则与流程
1、去除抗性基因 Neo:选择阳性TurboKnockout KI小鼠与野生型小鼠杂交,获得去除打靶载体中的 Neo 基因的杂合子F1代小鼠;
2、再挑选一对杂合子F1 代小鼠进行自交,通过 PCR 鉴定筛选得到去除Neo的F2代纯合子KI小鼠。
野生型小鼠杂交
TurboKnockout基因敲除:实现跨越“嵌合体”阶段且自删除Neo,减少两代繁育时间
基于ES打靶技术的TurboKnockout技术采用了独特的建系和基因改造技术,建立了具有高效遗传优势的TurboKnockoutES细胞系,通过特定胚胎发育阶段的显微注射,使TurboKnockoutES细胞****代替內源ES细胞,从而实现跨越“嵌合体”阶段,把ES打靶构建周期缩短至6-8个月。并且TurboKnockout采用独特的Self-deletingNeoCassette所获得的TurboKnockout小鼠与任何品系小鼠交配,都可以****自删除Neo。也就是说,TurboKnockout不仅实现跨越“嵌合体”阶段,还能真正自删除Neo,从而快速获得去除Neo的杂合子小鼠。