病毒清除检测 病毒清除验证 病毒清除试验 病毒清除与灭活验证

飞凡检测 病毒清除/灭活验证

单克隆抗体、重组蛋白等生物制品以靶向性强、副作用小、疗效显著等特点成为生物医药行业非常重要的一类产品，引领全球医药市场，也是未来生物医药行业发展的重要动力。

一、研究背景

1. 质量即生命

由于生物制品通常是通过直接注射的方式给药，如果产品被病毒污染，可能会对患者造成重大伤害。

表一生物制品受病毒污染的个案

动物细胞在现代生物制品中常被用作蛋白质表达生产系统，以保证产品的正确构象和活性。其中比较常见的生物制品是中国仓鼠卵巢细胞系(CHO细胞)。作为啮齿类动物细胞，CHO细胞常表达内源性逆转录病毒样颗粒，细胞上清液中可检测到103~ 109个/ml的逆转录病毒样颗粒。这些颗粒的形态、生化特性和序列与传染性逆转录病毒相似。

外源性病毒污染可能发生在 cho细胞培养过程中，各国的药物监管机构要求，净化过程必须通过临床前和生产前申报材料中的病毒去除/灭活来核实，以确保注射用临床试验病人或上市产品不会发生病毒污染，从而导致重大医疗事故。

图1病毒清除/灭活环节在生物制品产业链中的地位

美国和欧盟的法律法规建立较早，制度相对健全，国内法律法规发布较晚，主要是在参考美国和欧盟法律法规的基础上，结合自身实际，做出了一些改进。

随着越来越多的生物制品企业在国外申报或在国内外申报，本文梳理了国内外病毒清除和验证的法律法规和指导原则，如表2所示。

表2国内外病毒清除和验证法律法规

第二，病毒移除验证通常指示病毒

在病毒清除/灭活核查中，**的情况是核实每一种可能被污染的病毒，研究数据越多，覆盖范围越广，报告越有说服力，但考虑到时间、人力和资金的成本，再做每一种病毒都是不现实的。

结合现有的科学研究，美国和欧盟等药物监管机构的官员以及病毒学领域的科学家提出了指示病毒的概念，认为用于病毒清除核查的病毒可以包含以下四个特征:”单链和双链 rna 和 dna、脂质和非脂质膜、强抗性和弱抗性、大颗粒和小颗粒等”.

具体来说，在IND阶段，逆转录病毒、细小病毒和疱疹病毒的病毒清除能力主要作为抗体或融合蛋白的病毒清除的验证指标。在NDA和BLA阶段，主要使用3~ 5种指示病毒，其他病毒如呼肠孤病毒、小核糖核酸病毒和多瘤病毒的比例会增加。

表3四种常用指示病毒的特性

三、国内外病毒清除核查申报的区别

1. 指示病毒的差异

国内的指南要求更详细、更具体的要求，明确指出病毒的类型；国外的规则没有明确病毒的具体要求，只要求尽可能选择与被污染产品*相似的病毒进行验证，即特定的指示病毒；需要关注理化性质广泛的非特异性病毒。

2. 工艺选择上 的差异

一般选用国产低 ph 值和膜过滤两种工艺进行验证; 对外报关，除选用低 ph 值和膜过滤外，还用于色谱工艺验证。

3.过程重复性的差异

国内的指引并非强制性的，但通常需要三个批次，而外国的指引则规定至少进行两项独立的研究，以确定清关的可重复性，通常是一批样本重复两次。

四、中国病毒清除/灭活验证技术服务机构

目前，开展病毒清除验证研究的方法主要有企业自我验证、第三方验证和中级检察院(中国食品药品检验所)验证三种。由于建立二级生物安全实验室的费用高昂，以及难以建立符合国内和国际报告标准的病毒去除/灭活核查系统，例如为成本控制目的获得相应的指示性菌株，大部分生物治疗企业主要是向中级人民检察院或第三方组织提出对病毒消除和灭活进行核查。

近年来，单克隆抗体、重组蛋白等生物制品的研发如火如荼。在众多生物制药企业的迫切需求下，第三方技术服务机构逐渐增多，并逐渐与国际接轨。目前国内第三方检测机构包括苏州飞凡等。

五、小结

目前，只有少数生物制品的病毒清除/灭活认证机构。一些机构使用不同的方法或采用不同的病毒进行核实。他们的报告没有得到海外评审机构的批准，有时候你不得不去外国评审机构。我国需要深入开展病毒消除与验证领域的研究，借鉴国际先进的理念和经验，开展科学研究，增强产业实力。