CHO细胞简介
CHO细胞属于成纤维细胞,是一种非分泌型细胞,它本身很少分泌CHO内源蛋白,对目标蛋白分离纯化工作十分有利。可形成有活性的二聚体(如白介素2),具有糖基化的功能(如EPO),CHO为表达复杂生物大分子的理想宿主。该细胞存在遗传缺陷,无脯氨酸合成基因,不能将谷氨酸转变为谷氨酸-半醛,培养过程中需在培养基中添加L-脯氨酸才能生长。并且由于该细胞已经霍乱毒素适应,形态学有所改变。Zui初细胞为贴壁型细胞,经多次传代筛选后,也可悬浮生长。
CHO细胞特性
CHO细胞虽可像微生物细胞一样,在人工控制条件的生物反应器中进行大规模培养,但其细胞结构和培养特性与微生物细胞相比,有显著差别:动物细胞比微生物细胞大得多,无细胞壁,机械强度低,对剪切力敏感,适应环境能力差;倍增时间长,生长缓慢,易受微生物污染,培养时须用抗生素;培养过程需氧量少;培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在,原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡;代谢产物具有生物活性,生产成本高,但附加值也高。
CHO细胞结构
具有不死性,可传百代以上,是生物工程广泛使用的细胞系
属于成纤维细胞,可贴壁培养,经多次传代筛选后也可悬浮培养
一种非分泌细胞,本身很少分泌内源蛋白,对目标蛋白分离纯化十分有利
形成有活性二聚体,具有糖基化功能,是表达复杂生物大分子的理想宿主
CHO细胞表达系统优点
具有准确的转录后修饰功能,表达的糖基化药物蛋白分子在分子结构.理化特性和生物学功能更接近天然蛋白分子
具有产物胞外分越功能,便于下游产物分离纯化
具有重组基因的高效扩增和表达能力
具有贴壁生长特性,可以进行悬浮培养,具有较高的表达能力
CHO细胞的一些问题
构建重组CHO细胞生产效率低,产物浓度也低
某些糖基化表达产物不稳定,不方便纯化
重组细胞上游构建与下游分离纯化脱节,主要表现在,上游高效表达与下游有效提取之间的矛盾
重组细胞培养费用昂贵,自动化水平低下
CHO细胞展望
随着以CHO细胞为主的动物细胞表达系统日益完善,动物细胞将成为基因工程药物的主要宿主细胞.研发人员将对以下问题进行主要研究
1.提高表达水平,如发展些新的强启动 子,装配适合于高效表达的必要元件
2.在提高表达的注重下游分离纯化,如改变中的个别序列,使表达产物在不影响生物活性的前提下携带有利于分离纯化的基团
3.细胞培养成本的控制,高密度高产量和培养设备的大型化自动化和精窍化
4.分离纯化的低成本和高活性回收率