重组C因子法的原理 细菌内毒素检测 荧光定量检测 飞凡检测 第三方检测机构

细菌内毒素检测是确保药品和医疗器械安全性的重要环节，特别是在预防革兰氏阴性菌感染方面。传统的细菌内毒素检测方法依赖于鲎试剂（LAL）测试，但这种方法存在一些局限性，如对动物源性成分的依赖和可能的假阳性结果。为了克服这些限制，重组C因子法（rFC）被开发出来，并逐渐被认可和采用。

重组C因子法（rFC）的原理和优势：

1. 原理：重组C因子法是通过体外重组技术生产鲎凝血级联反应的第一个组分——C因子。这种方法模拟了鲎血液中的天然反应，但不依赖于鲎血，避免了对动物的依赖和相关的伦理问题。

2. 优势：

• 高特异性：rFC法具有更高的特异性，能够有效区分内毒素和其他可能引起假阳性的物质，如β-1,3-葡聚糖。

• 供应安全性：由于不依赖动物源性成分，rFC法提供了更高的供应安全性和批间一致性。

• 操作简便：rFC法通常只需一步反应，简化了操作流程，提高了检测效率。

• 宽动态范围：rFC法的检测范围较广，能够覆盖从0.005到5EU/ml的内毒素浓度。

• 符合3R原则：即替代（Replacement）、减少（Reduction）、精炼（Refinement），rFC法是动物试验的替代方法，符合现代科学和伦理要求。

合规审批历史：

• 美国：2012年6月，美国食品药品管理局（FDA）发布了指南文件，将rFC法作为LAL法的替代方法。2018年9月，FDA首次批准使用rFC法进行细菌内毒素放行检测的药物。

• 欧洲：2015年7月，欧洲药典将rFC法列为替代LAL和家兔热源测试的内毒素检测方法。2019年1月，中国药典也将rFC法列为细菌内毒素检测方法。

检测流程：

1. 标准内毒素贮备液制备：使用经过guojibiaozhun标定的内毒素标准品制备贮备液。

2. 供试液制备：溶解或稀释原料药或制剂制备供试液，必要时调整pH值。

3. Zui大有效稀释度确定：根据试剂盒或药典描述的方法进行确定。

4. 荧光定量检测：基于内毒素浓度和试剂混合物在孵育结束后的荧光之间的定量关系。

5. 预检测：确保荧光技术有效性，证明供试液对检测无干扰。

6. 标准曲线标准：使用标准内毒素溶液制作标准曲线，相关系数|r|必须大于等于0.980。

7. 干扰因子测试：评估供试液中是否存在干扰因子，并采取适当的处理方法消除干扰。

重组C因子法为细菌内毒素检测提供了一种高效、准确且符合伦理要求的替代方法。随着全球对动物福利和可持续性的日益关注，rFC法有望成为未来药品和医疗器械内毒素检测的主流方法。