过氧化氢酶(Catalase,CAT)酶活力的检测是评估其在生物样品中活性的重要手段,主要通过测定其催化过氧化氢(H2O2)分解的能力来实现。以下是几种常见的检测方法和步骤概述:阿
1. 比色法
原理:利用过氧化氢酶催化H2O2分解的特性,通过加入特定的指示剂(如钼酸铵或生色底物),生成可定量的产物。例如,Elabscience的试剂盒利用钼酸铵终止反应,剩余的H2O2与之反应形成淡黄色络合物,在405nm处测定吸光度。
步骤:样品处理后,与试剂混合,测定反应前后吸光度变化,计算酶活力。
2. 分光光度法
原理:基于过氧化氢酶催化H2O2产生水和氧气的反应,监测H2O2消耗或产物的生成。Worthington的方法使用4-氨基安替比林作为氢供体,监测510nm处吸光度的增加。
步骤:将酶与过氧化氢、4-氨基安替比林和苯酚混合,通过吸光度变化计算单位时间内H2O2的分解量。
3. 高锰酸钾滴定法
原理:过氧化氢能够还原高锰酸钾,通过测量高锰酸钾的消耗量来间接测定过氧化氢酶活性。
步骤:在样品中加入过量高锰酸钾,反应后剩余的高锰酸钾用标准溶液滴定。