根据NY/T2640-2014标准,果汁中花青素检测需采用高效液相色谱法测定飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素共6种花青素,以下为具体内容:
适用范围与原理
适用范围:本标准规定了植物源性食品中的飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素共6种花青素的高效液相色谱测定方法,适用于植物源性食品中花青素含量的测定,包括果汁。
原理:植物源性食品中的花青素主要以花色苷的形式存在。试样经乙醇-水的强酸溶液超声提取花色苷后,经沸水浴将花色苷水解成花青素,用高效液相色谱法测定,以保留时间定性,外标法定量。
试剂和材料
除非另有规定,仅使用分析纯试剂。水为GB/T 6682规定的一级水。
包括无水乙醇、甲酸、甲醇、等色谱纯或优级纯试剂,以及特定纯度的花青素标准品。
提取液为无水乙醇、水、按2:1:1(V+V+V)混合而成。
仪器与设备
高效液相色谱仪带紫外或二极管阵列检测器。
天平(精度0.01mg、0.01g)。
水浴锅(精度±2℃)。
匀浆机等。
分析步骤
试样制备:采用四分法分取样品,含水率高的样品(如葡萄汁)取约200g于匀浆机中匀浆;含水率低的样品(如需粉碎处理的果实制成的果汁原料)用粉碎机进行粉碎,过250μm的筛。所有样品在-18℃条件下保存。
提取:根据样品中花青素含量,称取样品1.00g~10.00g于50mL具塞比色管中,加入提取液定容至刻度,匀浆1min后,超声提取30min。
水解:超声提取后,于沸水浴中水解1h,取出冷却后,用提取液定容。静置,取上清液,用0.45μm水相滤膜过滤,待测。样品制备好后,在4℃条件下,保存时间不超过3d。
测定:
色谱参考条件:色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm×5μm)或性能相当者;流动相A为含1%甲酸水溶液,流动相B为含1%甲酸乙腈溶液;检测波长为530nm;柱温为35℃;进样量为20μL;梯度洗脱条件需根据具体仪器和色谱柱进行调整。
色谱分析:分别将标准溶液和试样溶液注入液相色谱仪中,以保留时间定性,以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。
结果计算
样品中花青素含量为6种花青素含量之和,其含量以质量分数ω计,单位为毫克每千克(mg/kg),计算公式为:ω=ρ×V/m,其中ρ为待测液中各花青素的质量浓度(mg/L),V为定容体积(mL),m为试样质量(g)。
精密度
本标准精密度数据按照GB/T 6379.1和GB/T6379.2的规定确定,获得重复性和再现性的值是以95%的置信度来计算。