苏州鱼罐头凝结芽胞杆菌检测化验

　　1．试样制备：

　　罐头样品预先经55℃保温一周，按正常方法进行开罐，吸取内容物液体1毫升，如为固体内容物则取1克，以无菌手续接种于3＃培养基中，每罐接种2支。

　　2．增菌培养

　　接种试样的3＃培养基试管，于55℃培养48小时，如发现指示剂由紫变黄即判断为阳性，进行涂片镜检为芽胞杆菌（有时不易检到芽胞），如阳性需继续培养48小时。

　　3．纯分离培养

　　将阳性培养基试管划线接种于3＃培养基琼脂平板55℃培养48小时，检查有无可疑菌落（菌落黄色，周围有黄色环，中心色深不透明），如有可疑菌落则接种于普通琼脂斜面和芽胞培养基斜面，55℃培养24小时，涂片镜检观察有无芽胞，以及芽胞的形状及位置，并以普通琼脂斜面培养物进行生化学试验。

　　4．鉴别：

　　菌体形态：为革兰氏阳性芽胞杆菌。

　　生化反应：取上项斜面培养物按下列项目进行鉴别。

　　平酸菌生化反应鉴别表

注：＋为产酸或阳性，-为阴性
d＋：50－85％的阳性
d－：15－－49％的阳性
b：25－49％阳性
45－55℃培养三天后无反应报告为阴性。

5．培养基的配方

　　①3＃葡萄糖肉汤培养：
　　 蛋白胨 5克 葡萄糖 5克
　　 酵母浸膏 1克 牛肉膏 5克
　　 可溶性淀粉 1克 黄豆浸出液 50mL
　　 水1000mL 0.4%溴甲酚紫 4mL
　　 pH 7.0-7.2
　　 115℃高压灭菌15min

　　②3＃培养基琼脂：

　　3＃葡萄糖肉汤 1000mL
　　琼脂 18－20克
　　pH 7.2－7.4　　 121℃高压灭菌15min

　　③酸性胰胨琼脂

　　胰蛋白胨 5克 酵母膏 5克
　　葡萄糖 5克 K2HPO4 4克
　　水1000mL 琼脂 18－22克（15－20g)
　　琼脂粉 12克
　　pH5.0 　121℃高压灭菌15　min

　　④7%NaCL肉汤

　　蛋白胨 5克 牛肉膏 3克
　　NaCL 70克 水 1000mL
　　pH7.0 121℃高压灭菌15min

　　⑤芽胞培养基

　　牛肉膏 10克 蛋白胨 10克
　　NaCL 5克 K2HPO4 3克
　　(K2HPO4 3H2O 3.9克）
　　MnSO4 0.03克 琼脂 25克
　　pH 7.2 121℃高压灭菌15min

　　⑥V－P培养基

　　蛋白胨 5克 葡萄糖 5克
　　K2HPO4 5克 蒸馏水 1000mL
　　pH7.2 121℃高压灭菌15min

　　⑦西蒙氏枸橼酸盐琼脂（柠檬酸盐）

　　NaCL 5克 硫酸镁 0.2克
　　磷酸铵(NH4H2PO4）1克 磷酸氢二钾K2HPO4）1克
　　枸橼酸钠 5克
　　琼脂 20克 蒸馏水 1000mL
　　0.2％溴麝香草酚兰酒精溶液 40mL
　　pH 6.8 121℃高压灭菌15min

　　⑧童汉氏蛋白胨水

　　蛋白胨 10克 NaCL 5克
　　蒸馏水 1000mL pH 7.4
　　121℃高压灭菌15min

　　⑨硝酸盐肉汤

　　牛肉膏 3克 蛋白胨 5克
　　硝酸钾 1克 蒸馏水 1000mL
　　pH 7.0 121℃高压灭菌20min(15min)