（1）水温
实验中应保持鱼类原来的适应温度，一般冷水鱼温度为12～18℃，温水鱼温度为20～28℃。为使得实验结果可靠，在同一实验中，温度的波动范围不要超过4（即±2℃）。冬天可以通过加热室内的空气温度达到调节水温的目的，也可以采用电热棒直接控制调节水温。
（2）pH
水的pH与水生生物的代谢作用有密切关系。对毒物的毒性作用也有一定的影响。在实验中应维持pH在鱼类适宜范围内。一般实验液的pH在6.7～8.5为宜。如需调节pH，可用1M或0.1M的HCl和NaOH来调节受试物贮备液的pH。调节贮备液的pH时不能使受试物浓度明显改变，或发生化学反应或沉淀。
（3）溶解氧
溶解氧是鱼类生存的必要条件，它能影响鱼类对毒物的敏感性。一般温水鱼要求溶解氧在4mg/L以上，冷水鱼要求溶解氧在5mg/L以上。
（4）硬度
水的总硬度为10～250mg/L（以CaCO3计）。
三、实验步骤
1、预试验
用确定正式实验所需浓度范围，可选择较大范围的浓度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每个浓度放入5条鱼，可用静态方式进行，不设平等组，试验持续48h～96h。每天至少两次记录各容器内的死鱼数，并及时取出死鱼。求出24h死亡浓度和96h无死亡浓度。
如果依次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度范围，应另选一浓度范围进行预试验。
2、正式实验
根据预试验得出的结果，在包括使鱼全部死亡的浓度和96h鱼类全部存活的浓度之间至少设置5个浓度组，并以几何级数排布。浓度间隔系数应≤2.2。
每个试验浓度组应至少设2～3个平行，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂对照组，其浓度与试剂中的高溶剂浓度相同。试验鱼的数目以每组实验浓度10～20尾合适，不得少于10尾。
试验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随机取出鱼并随机迅速放入各试验容器中。转移期间处理不当的鱼均应弃除。同一试验，所有试验用鱼应30min内分组完毕。
在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。如果没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。应在试验开始后3h或6h观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积等）。
试验开始和结束时要测定pH、溶解氧和温度。试验期间，每天至少测定一次。
至少在试验开始和结束时，测定实验容器中试验液的受试物浓度。
试验结束时，对照组的死亡率不得超过10%。
