摘要
本发明属于环境水体的检测方法领域，具体涉及一种污水急性生物毒性的检测方法。该方法通过对污水样品中的有机物进行萃取和浓缩，排除无机物的干扰后，运用淡水发光细菌——青海弧菌Q67进行检测，建立了准确检测污水水样急性生态毒性的方法。本方法结果准确、稳定、重现性好，是对现有方法的有效改进。
权利要求书
1.一种污水急性生物毒性的检测方法，其特征在于，该方法按下列步骤进行：
步骤一，样品处理：
按照标准取样方法采取污水样，并对样品进行如下处理：
(1)依次将7mL的二氯甲烷、7 mL的甲醇、7mL的纯水通过C18固相萃取小柱对柱子进行润湿活化;
(2)取500 mL经0.45μm滤膜过滤后的污水样上柱，使污水样连续通过C18固相萃取小柱，并调节真空泵使流出液流速为3mL/min;
(3)待污水样全部流出柱后用5 mL纯水过洗柱子，接着继续真空抽气干燥15min，而后将C18固相萃取小柱放入离心机中离心;
(4)用二氯甲烷洗脱柱子，收集洗脱液，并将所得洗脱液用高纯氮气吹干，用5mL体积分数为0.5%的二甲基亚砜溶解所得吹干物，得到浓缩样品溶液;
(5)将浓缩样品溶液用0.9%的生理盐水配制成系列浓度梯度的待检测样品溶液;
步骤二，青海弧菌Q67菌悬液的制备：
(1)将青海弧菌Q67菌种转接到50 mL液体培养基中，22℃条件下，培养10～12 h;
(2)将得到的菌体培养液在12000 rmp 条件下离心10 min 后弃去上清液，接着对沉淀的菌体细胞进行3次洗涤：即用10mL 0.9%的生理盐水重悬、12000 rmp 离心10 min，将经洗涤的菌体细胞用10 mL0.9%的生理盐水重悬，得到青海弧菌Q67菌悬液;
步骤三，污水样急性生物毒性的检测：
对步骤一中所得到的每个待检测样品溶液进行如下检测：
(1) 在1.5 mL样品检测管中加入100 μL待检测样品溶液，并取100 μL 0.9%的生理盐水加入1.5mL对照检测管中作为空白对照样，其中样品及空白对照样均有3~5个平行样;
(2)上述各检测管中分别加入100 μL青海弧菌Q67菌悬液，且各检测管之间加菌悬液的时间间隔为15 s;
(3)菌悬液加入完900s后，采用发光细菌检测仪，按照加青海弧菌Q67菌悬液的检测管的顺序，依次对各样品及对照样进行发光强度检测，读取其相对发光值;
步骤四，结果计算：
(1)计算出对照样的相对发光值平均值I0和不同浓度待检测样品的相对发光值平均值I，按(式A)计算出不同浓度待检测样品对发光细菌的相对抑制率E;
(式A)
(2)以待检测样品的浓度为纵坐标，以不同浓度待检测样品的相对抑制率E为横坐标作定量标准曲线，并从该曲线上读取出相对抑制率为50%时所对应的浓度，即半数发光抑制率浓度EC50，EC50值越大，毒性越小;
(3)用(式B)计算总影响指数TII50，并以此来反映污水样品的生物毒性，TII50 值越大，毒性越大;
(式B)。
2.如权利要求1所述的污水急性生物毒性的检测方法，其特征在于，步骤二中所述的液体培养基中各成分相对于蒸馏水质量的质量分数为：胰胨：0.5%、酵母膏：0.5%、甘油：0.3%、MgCl2：0.32%、KBr：0.02%、CaSO4：0.01%、NaCl：0.4%、KCl：0.4%，pH 为8.5±0.5。
