总游离氨基酸检测
实验原理:游离氨基酸的游离氨基可与水合荀三酮作用,产生蓝紫色的化合物二酮茆一二酮茆胺,产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比,用分光光度计在570nm下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应,在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.
仪器与用具;100ml容量瓶:漏头;三角瓶研钵;刻度吸管:.0.1mlx1.1mls2.2mls2、5mls1溃水浴:昊寨刻度试箴20mlx10;分光光度计:
一、试剂
1.水合茆三铜:称重结晶的荀三铜0.6g,装入烧杯,加入正丙醇15ml,使其溶
解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液(pH=5.4)9ml,混匀,棕色瓶冰箱保存,10天内有效。2.乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.4)︰称取化学纯乙酸钠54.4g,加入无氨蒸馏水
100 ml,电炉加热至沸,使其体积减半,冷却后加冰乙酸30 ml,加蒸馏水定容至100ml,3.氨基酸标准溶液:**称取80°℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10%异
丙醇并定容至50ml。取此液5ml蒸馏水稀释到50ml,即为5ug/ml氨基酸标液。4.0.1%抗坏血酸:称取0.050g抗坏血酸,溶于50ml蒸馏水中,即配即用。5.10%乙酸