红球藻中虾青素的测定
液相色谱法
1范围
本标准规定了红球藻(Haematococcus)中虾青素的液相色谱测定方法。
本标准适用于雨生红球藻(Haematococcus plurvialis)莱粉中虾青索含量的测定。
2规范性引用文件
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样经二氯甲烧与甲醇混合溶液提取,氢氧化钠甲醇溶液皂化,使其中的虾青素酯转化成游离态的虾青素,经Csn反相液相色谱柱分离后,用配有紫外检测器的液相色谱仪测定,外标法定量。
4试剂
所用试剂除另有规定外均为色谱纯。
4.1 试验用水应符合GB/T 6682中一级水的要求。
4.2丙酮。
4.3磷酸;优级纯。
4.4氢氧化钠;优级纯。
4.5甲醇。
4.6二氯甲烷。
4.7叔丁基甲基醚。
4.82,6-二叔丁基对甲酚:化学纯。
4.91%磷酸溶液(体积分数):量取10 mL磷酸(4.3)和990 mL水,混匀后备用。
4.10二氯甲烷-甲醇溶液;量取250 mL二氯甲烷和750 mL甲醇,加入 0.5 g2,6-二叔丁基对甲酚(4.8),混匀后备用。
4.11 0.1 mol/L氢氧化钠-甲醇溶液;称取0.4g氢氧化钠(4.4),用甲醇溶解并稀释至100mL,混勾后备用。
4.12 2%磷酸-甲醇溶液(体积分数);量取2mL 磷酸(4.3)和98 mL甲醇,混勾后备用。
4.13全反式虾青素.13-顺虾青素、9-顺虾青素标准品;纯度≥95%。
4.14全反式虾青素标准储备溶液;准确称取全反式虾青素标准品约10 mg,用丙酮溶解并定容于500mL容量瓶中,此溶液浓度为20 ug/mL,充氮密封,置-18℃冰箱中避光保存,有效期1个月.