Zui小抑菌浓度 比色微量稀释测定法 PMA-qPCR 方法 E-test 第三方检测机构

Zui小抑菌浓度（Minimum InhibitoryConcentration，MIC）是指在体外实验条件下，能够完全抑制细菌生长的抗菌药物的Zui低浓度。MIC的测定对于评估抗菌药物的效能和指导临床合理用药具有重要意义。以下是几种常用的MIC测定方法：

1. 微量肉汤稀释法

• 抗菌药物和培养基制备：与常量肉汤稀释法相同。

• MIC板制备：无菌操作下，将抗菌药物溶液倍比稀释后加入到96孔聚苯乙烯板中，每孔10μl，第12孔作为生长对照。

• 接种物制备：用生长法或直接菌悬液法制备菌悬液，经稀释后向每孔中加入100μl。

• 孵育：35℃下孵育16~20小时，特定细菌如嗜血杆菌属、链球菌属孵育时间为20~24小时。

• 结果判断：以完全抑制细菌生长的Zui低药物浓度为MIC。

2. 琼脂稀释法

• 培养基制备：使用MH琼脂，按说明书配制，pH控制在7.2~7.4。

• 含药琼脂平板制备：将不同浓度的抗菌药物加入已溶解的MH琼脂中，制成含不同浓度抗菌药物的平板。

• 接种物制备与接种：制备菌悬液，用多点接种器接种于琼脂平板。

• 孵育：35℃孵育16~20小时，特定细菌孵育时间应满24小时。

• 结果判断：以抑制细菌生长的Zui低药物浓度为MIC。

3. E试验（E-test）

• 培养基、菌液制备和接种：与纸片扩散法相同。

• 贴E试验条：将E试验条的刻度面朝上贴于琼脂平板上。

• 孵育时间和温度：与纸片扩散法相同。

• 结果阅读：孵育后，围绕试条形成一个椭圆形的抑菌圈，试条上的读数刻度即是MIC。

4. 比色微量稀释测定法

• 该方法通过标准化和验证比色和定量方法，能够确定抗菌化合物的MIC以及将吸光度值转换为CFU mL^-1。

• 使用0.125% (w/v) 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)溶液，在35°C下孵育22小时后添加，再孵育2小时后在分光光度计中读数。

• 测试的微生物包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌。

• 该方法显示出线性、精度、准确性和鲁棒性，可以确定50%（IC50%）和90%（IC90%）抗菌化合物的抑菌浓度。

5. PMA-qPCR方法

• 这是一种用于鉴定和定量活菌的方法，它不是直接测定MIC，但它可以用来评估抗菌化合物对微生物存活的影响。

6. 其他方法

• 包括纸片扩散法、改良的肉汤微量稀释法、数字PCR测定法等，这些方法在不同的研究中被用来评估抗菌化合物的活性。

每种方法都有其特定的应用场景和优势，选择合适的方法需要考虑实验条件、可用资源和所需的信息类型。MIC的测定对于新抗菌药物的开发、药物敏感性测试和抗药性研究都是至关重要的。