发光细菌法 EC50测定 毒理学实验 飞凡检测 第三方检测机构

发光细菌法是一种用于测量水质急性毒性的生物检测方法，它通过测定毒物对发光细菌发光强度的影响来评估毒性。这种方法因其简便、快速、灵敏和成本较低而受到重视。以下是关于发光细菌法测量EC50（半数有效浓度）的基本原理和步骤：

原理：发光细菌在正常生理条件下能够发射可见荧光，当受到毒物影响时，其细胞活性下降，导致发光强度降低。毒物的毒性可以用EC50表示，即发光细菌发光强度降低50%时毒物的浓度。

样品采集与保存：样品应在采集后6小时内进行毒性测定，或在2-5℃下保存不超过24小时。含固体悬浮物的样品需离心或过滤去除。

仪器设备：需要生物发光光度计、测试样品管、微量注射器、注射器、定量加液瓶、吸管、试剂瓶、量筒、棕色容量瓶和半微量滴定管等。

试剂和材料：包括氯化汞、氯化钠、明亮发光杆菌T3小种冻干粉等。

试验程序：

稀释样品液：根据预试验结果，选择适当的样品稀释浓度。

测定条件：室温20-25℃，pH和溶解氧根据需要进行调整。

测定步骤：包括试管排列、加氯化钠溶液、加样品液、发光细菌冻干菌剂复苏、仪器预热和调零、检验复苏发光细菌冻干粉质量、给各测试管加复苏菌液、发光细菌与样品反应达到终止时间的读数等。

质量保证与质量控制：确保使用同一批发光菌进行测定，控制反应时间，确保重复测定结果的相对偏差在允许范围内。

测试结果的表达：计算样品相对发光度，并建立氯化汞浓度或样品稀释浓度与相对发光度的相关方程，从而求出样品的EC50值。

结果评价和报告：根据测定结果，用氯化汞浓度或EC50值表达样品毒性，并编写包含实验室室温、采样地点、日期、时间、相关方程、样品EC50值等信息的报告。