肽含量的测定方法
B.1原理
高分子蛋白质在酸性条件下易被沉淀,相对分子质量较小的蛋白质水解物(酸溶蛋白质)可溶于酸性溶液(其中包含肽及游离氨基酸)。样品经酸化后,滤液中的酸溶蛋白质含量减去游离氨基酸含量即为肽含量。
B.2试剂
实验用水应符合GB/T6682中二级用水的规格,使用试剂除特殊规定外,均为分析纯。
B.2.1三觚乙酸:15o g/L.
B.2.2硫酸铜(Cuso.-5H:O).B.2.3 硫酸钾。
B.2.4硫酸:密度为1.841 9 g/L.B.2.5硼酸溶液:20 g/L.
B.2.6 氢氧化钠溶液:400 g/L.B.2.7盐酸:优级纯。
B.2.8硫酸标准滴定溶液[c(1/2 H,SO,)=0.050 0 mol/1]或盐酸标准滴定溶液[c(HCI)=0.05o0 mol/L].
B.29混合指示液:1份1 g/L甲基红乙醇溶液与5份1 g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。或2份1g/L甲基红乙醇溶液与1份1 g/L亚甲基蓝乙醇溶液临用时混合。
B.2.10混合氨基酸标准液:0.002 5 mol/L.
B.2.11 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6 g柠檬酸钠(NaCH,0,·2H,O),加入 16.5mL浓盐酸并加水稀释到1 000 mL,用浓盐酸或500 g/L的氢氧化钠溶液调节pH至2.2.
B.2.12pH3.3的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6 g柠檬酸钠,加人 12 mL浓盐酸并加水稀释到1 o00mL，用浓盐酸或500 g/L的氢氧化钠洛液调节pH至3.3.
B.2.13 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液;称取19.6 g柠檬酸钠,加入9 mL浓盐酸并加水稀释到1 000mL,用浓盐酸或500 g/L的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
B.2.14pH6.4的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6 g柠檬酸钠和46.8g氯化钠(优级纯),加水溶解并稀释到1 000mL,用浓盐酸或500 g/L的氢氧化钠溶液调节pH 至6.4。
B.2.15 pH5.2的乙酸锂溶液:称取氢氧化锂(LiOH ·H,O)168 g,加入冰乙酸(优级纯)279mL,加水稀释到1 000 mL,用浓盐酸或500 g/L的氢氧化钠洛液调节pH 至5.2。
B.2.16茆三酮溶液:取150 mL 二甲基亚矾(CH,OS)和50mL乙酸锂溶液,加入4g水合茆三酮(C,HO·H,O)和0.12 g还原*三酮(C HoO。·2H,O搅拌至完全溶解。
