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PCR-SSCP技术 聚合酶链式反应 PCR扩增 第三方检测机构 飞凡检测

更新:2024-05-08 18:00 发布者IP:114.220.116.43 浏览:0次
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苏州飞凡检测科技有限公司商铺
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苏州飞凡检测科技有限公司
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91320583MACBCN9121
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人民币¥8000.00元每件
关键词
第三方检测机构,PCR-SSCP技术,聚合酶链式反应,PCR扩增,飞凡检测
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产品详细介绍

PCR-SSCP技术是一种分子生物学分析方法,由日本Orita等于1989年创建,是筛查突变的新技术。这种技术结合了PCR(聚合酶链式反应)和SSCP(单链构象多态性)的原理。

PCR技术是一种在引物参与下,由酶催化特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。它具有灵敏度高、简便、快速的特点,且对标本的纯度要求低。

而SSCP技术则基于DNA单链在中性条件下会形成特定的空间构象,这种构象在电泳时会呈现特定的电泳条带。如果DNA序列发生变化,即使只有一个碱基变化,其空间构象也可能发生改变,从而导致电泳条带的变化。因此,通过比较被检DNA与已知序列的对照DNA的电泳条带,可以判断DNA序列是否发生了变化。

PCR-SSCP技术将两者结合,首先利用PCR技术扩增目标DNA,然后将PCR产物变性为单链,并通过SSCP技术判断其电泳条带的变化,从而检测DNA序列是否存在突变。

技术原理

PCR-SSCP分析的基本步骤包括:

  1. PCR扩增:首先,使用特定的引物对目标DNA序列进行PCR扩增。

  2. 单链构象制备:PCR产物在加热至95°C的条件下变性,使双链DNA解链为单链。单链DNA在较低温度(通常在50-65°C之间)下复性,此时其构象稳定。

  3. 凝胶电泳分析:将复性的单链DNA加载到聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。由于单链DNA的构象差异,它们在凝胶中的迁移率会有所不同,从而实现分离。

  4. 染色和分析:通常使用银染或荧光染料对凝胶进行染色,然后通过成像系统进行分析,观察单链DNA的迁移模式。

应用

PCR-SSCP技术广泛应用于:

  • 基因突变检测:通过比较野生型和突变型DNA的迁移模式,来识别序列中的变化。

  • 遗传多样性分析:研究不同个体或种群间的遗传差异。

  • 疾病相关基因研究:寻找与特定疾病相关的基因突变。

  • 进化研究:分析物种间或物种内的遗传差异。

优点与局限性

  • 优点:PCR-SSCP方法简单、快速、成本低,不需要复杂的设备。

  • 局限性:该技术的灵敏度和特异性相对较低,对于大规模的突变检测可能不够jingque。此外,它不能确定具体的突变类型。


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法定代表人王跃华
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