OECD474标准,即《哺乳动物红细胞微核试验》,是一种用于评估化学物质和产品是否能引起哺乳动物体内染色体损伤或有丝分裂器损伤的生物学测试方法。该测试特别关注于微核的形成,微核是细胞分裂过程中未能正确分配到子细胞核中的染色体片段或整个染色体,它们留在细胞质中形成的小核。
测试原理
目标细胞:主要使用骨髓嗜多染红细胞(PCEs)和/或外周血红细胞。
损伤检测:通过分析这些细胞中的微核频率,来判断受试物质是否导致遗传损伤。
实验动物:通常使用小鼠或大鼠,因为它们的骨髓容易取样且反应性良好。
实验步骤
动物处理:将受试物质给予实验动物,通过口服、吸入或注射等途径。
取样:在特定时间点处死动物,取骨髓或血液样本。
制片与染色:对样本进行制片,常用吉姆萨或苯胺蓝染色,以便于在显微镜下观察。
微核计数:在嗜多染红细胞中寻找并计数微核的数量,与未处理的对照组比较。
结果分析
统计分析:比较处理组与对照组的微核率,使用统计方法确定差异是否具有显著性。
剂量反应关系:评估不同剂量下的微核率变化,以确定是否存在剂量依赖性效应。
毒性评估:考虑细胞毒性,因为严重的细胞毒性也可能导致微核率增加,需要区分是直接遗传毒性还是间接效应。