慢病毒包装实验 病毒滴度测定 逆转录病毒 飞凡检测 第三方检测机构

2024-11-22 18:00 121.239.198.164 1次
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苏州飞凡检测科技有限公司
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91320583MACBCN9121
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人民币¥8000.00元每件
关键词
飞凡检测,慢病毒包装实验,病毒滴度测定,逆转录病毒,第三方检测机构
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苏州工业园区唯亭双泾街59号4号楼202室(注册地址)
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产品详细介绍

慢病毒包装实验是一项复杂的实验过程,涉及多个步骤。以下是对慢病毒包装实验的简要介绍:

我们需要理解慢病毒的结构和特性。慢病毒是逆转录病毒的一种,其基因组为双链RNA。相比于一般的逆转录病毒,慢病毒具有更广泛的宿主范围,既能感染分裂细胞也能感染非分裂细胞。在实验中,慢病毒可以将靶基因随机整合到宿主细胞的基因组中,实现稳定表达若干代,为稳转细胞株的筛选提供了可能。

慢病毒包装实验的步骤如下:

前期准备:

  1. 构建含有目的基因的病毒载体,抽提高浓度、高纯度的包装质粒和目的质粒;

  2. 培养指数生长的293T细胞(培养条件:DMEM 10% FBS, 37℃,5% CO2);

  3. 准备试剂:胎牛血清、DMEM、Opti-MEM、lipo2000;

  4. 准备仪器设备:荧光显微镜。

病毒包装:

  1. 将目的质粒和包装质粒混合,加入适量 Opti-MEM 稀释至适当浓度;

  2. 将混合液加入293T细胞中,设置对照组;

  3. 使用荧光显微镜观察细胞病变现象,病变的细胞表现为细胞增大、圆形、荧光增强等;

  4. 收集病变细胞,离心后取上清液,即为含有慢病毒的溶液。

病毒滴度测定:

  1. 取适量病毒溶液,稀释至不同浓度;

  2. 将稀释后的病毒溶液感染293T细胞,培养一段时间;

  3. 使用荧光显微镜观察感染细胞,计算荧光细胞的比例;

  4. 根据稀释倍数和荧光细胞比例,计算病毒滴度。

病毒应用:

  1. 将目的基因沉默或过表达的慢病毒载体感染目标细胞;

  2. 培养目标细胞,观察目的基因的表达变化。

请注意,慢病毒包装实验需要在严格的生物安全条件下进行,以防止病毒的扩散和污染。实验者需要具备相应的专业知识和实验技能,以确保实验的顺利进行和结果的准确性。

慢病毒包装实验是一项复杂且重要的实验,通过合理的实验设计和严格的实验操作,我们可以获得具有特定功能的慢病毒,为基因治疗和细胞研究等领域提供有力的工具。


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