饲料中氨基酸的测定 B1检测

饲料中氨基酸的测定

测定方法

饲料中氨基酸的测定方法多样，主要包括酸水解法、碱水解法、酸提取法以及反相液相色谱法等。

1. 酸水解法：

• 常规水解法：适用于检测除含硫氨基酸（如胱氨酸、蛋氨酸等）和色氨酸以外的蛋白水解氨基酸。该方法通过使饲料蛋白在110℃条件下，用6mol/L溶液水解成单一氨基酸，再经离子交换色谱法分离，并以茚三酮做柱后衍生测定。但水解过程中色氨酸被全部破坏，不能测量，胱氨酸和蛋氨酸则部分氧化，使测定结果偏低。

• 氧化水解法：以偏重亚钠为氧化终止剂，适用于检测除酪氨酸以外的蛋白水解氨基酸。而以氢溴酸作为终止剂时，可以检测除酪氨酸、苯丙胺细算和组氨酸以外的蛋白水解氨基酸。

2. 碱水解法：仅适用于检测色氨酸。

3. 酸提取法：用于检测游离氨基酸、赖氨酸、蛋氨酸含量。

4. 反相液相色谱法：利用硫氰酸苯酯衍生剂进行柱前衍生法，可以快速、灵敏地检测氨基酸组分。该方法具有衍生方便、快速，衍生物单一、稳定的特点，可以在-20°C连续贮存数月。

测定步骤

以常规水解法为例，测定步骤大致如下：

1. 样品处理：称取一定量的试样（含蛋白7.5-25mg，准确至0.1mg）于安瓿或具玻璃塞水解管中，加6.0mol/L溶液，置液氮中冷冻，抽真空后封口或充氮气，塞紧。将水解管放在恒温干燥箱中，水解一定时间后冷却，混匀，开管，过滤。

2. 蒸发至干：用移液管吸取适量的滤液，置旋转蒸发器或浓缩器中，抽真空蒸发至干。必要时，加少许水，重复蒸干1-2次。

3. 上机测定：加入稀释上机用柠檬酸钠缓冲液，使样液中氨基酸浓度达一定范围，摇匀，过滤后离心，取上清液上机测定。

测定意义

饲料中氨基酸的测定对于评估饲料的营养价值、优化饲料配方、确保动物健康生长具有重要意义。通过准确的氨基酸检测，可以确保饲料中的氨基酸含量符合动物生长需要，提高养殖效益。

饲料中B1的检测

限量标准

根据GB13078-2001饲料卫生标准规定，饲料中黄曲霉毒素B1的允许量因饲料种类而异。例如，玉米、花生饼（粕）、棉籽饼（粕）、菜籽饼（粕）等饲料中黄曲霉毒素B1的允许量≤50μg/kg；豆粕中允许量≤30μg/kg；仔猪配合饲料及浓缩饲料中允许量≤10μg/kg；生长肥育猪、种猪配合饲料及浓缩饲料中允许量≤20μg/kg等。

检测方法

饲料中黄曲霉毒素B1的检测方法多样，主要包括传统的薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附测定（ELISA）以及免疫层析法等。

1. 薄层层析法：

• 微柱层析法：适用于各种配合饲料、单一饲料及饲料原料中B1的定性检验。通过制备微柱，利用氧化铝和硅胶G的吸附特性，将B1与其他杂质分离，在紫外灯下观察荧光环带以判断是否存在B1。

• 薄层色谱法：适用于各种配合饲料、单一饲料及饲料原料中B1的定量检验。试样中的B1经溶剂提取、净化、洗脱、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外光照射下产生紫蓝色荧光，根据其在薄层板上呈现荧光的Zui低检出量来测定其含量。

2. 高效液相色谱法：

• 具有高分辨率、高灵敏度等优点，是实验室常用的检测方法之一。通过高效液相色谱仪，设置合适的流动相和梯度洗脱程序，将样品中的黄曲霉毒素B1与其他组分分离，通过检测器检测并分析其含量。

3. 酶联免疫吸附测定（ELISA）：

• 利用特异性抗体与黄曲霉毒素B1结合的特性，具有快速、简便、灵敏等优点，适用于现场快速检测。通过酶联免疫吸附法，将样品中的黄曲霉毒素B1与特异性抗体结合，再加入酶标记的二抗，通过底物显色反应来测定黄曲霉毒素B1的含量。

4. 免疫层析法：

• 将ELISA技术与层析技术结合，简化了检测过程，提高了检测的便捷性。通过免疫层析试纸条，将样品中的黄曲霉毒素B1与特异性抗体结合，在层析过程中形成可见的检测线，根据检测线的颜色深浅来判断黄曲霉毒素B1的含量。