食品安全国家标准
食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验
1范围
本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验方法。
本标准第一法适用于蜡样芽胞杆菌含量较高的食品样品中蜡样芽胞杆菌的计数;第二法适用于蜡样芽胞杆菌含量较低的食品样品中蜡样芽胞杆菌的计数。
4.2操作步骤
4.2.1样品处理
冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2℃~5℃不超过18 h解冻,若不能及时检验,应放于一20℃~—10℃保存;非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验,若不能及时检验,应置于2℃~5 ℃冰箱保存,24 h内检验。
4.2.2样品制备
称取样品25 g,放入盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌均质杯内,用旋转刀片式均质器以8 000 r/min~10 000r/min均质1 min~2 min,或放入盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2min。若样品为液态,吸取25 mL样品至盛有225 mLPBS或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中,振荡混匀,作为1∶10的样品匀液。
4.2.4样品接种
根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),以0.3 mL,0.3 mL,0.4mL接种量分别移入三块MYP琼脂平板,用无菌L棒涂布整个平板,注意不要触及平板边缘。使用前，如MYP琼脂平板表面有水珠,可放在25 ℃~50℃的培养箱里干燥,直到平板表面的水珠消失。
4.2.5惇分离,培养
4.2.5.1―分离
在通常情况下,涂布后,将平板静置10 min。如样液不易吸收,可将平板放在培养箱30 ℃±1 ℃培养1h,等样品匀液吸收后翻转平皿,倒置于培养箱,30 ℃士1℃培养24 h士2 h。如果菌落不典型，可继续培养24 h士2h再观察。在MYP琼脂平板上,典型菌落为微粉红色(表示不发酵甘露醇),周围有白色至淡粉红色沉淀环(表示产卵磷脂酶)。
4.2.5.2纯培养
从每个平板(符合4.4.1.1要求的平板)中挑取至少5个典型菌落(小于5个全选),分别划线接种于营养琼脂平板做纯培养,30℃士1℃培养24 h士2h,进行确证实验。在营养琼脂平板上,典型菌落为灰白色,偶有黄绿色,不透明,表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状,边缘常呈扩展状,直径为4mm~10 mm,
4.3 确定鉴定
4.3.1染色镜检
挑取纯培养的单个菌落,革兰氏染色镜检。蜡样芽胞杆菌为革兰氏阳性芽胞杆菌,大小为(1 um~1.3 um)×(3 um~5um),芽胞呈椭圆形位于菌体中央或偏端,不膨大于菌体,菌体两端较平整,多呈短链或长链状排列。
